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其林貝爾

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大鼠發(fā)病機(jī)制分析(其林貝爾振蕩儀使用)

返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2020-03-16 09:24【

1 材料和方法 


1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 


健康雄性 Wistar 大鼠,體質(zhì)量 180~220 g,由北京維通利華動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,動(dòng) 物合格證編號(hào):SCXK(京)2016-001。飼養(yǎng)于天津市南開醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。 


1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑與儀器 


末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移 酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記測(cè)定(Tunel)試劑盒購自瑞 士 Roche 公司;Akt 抗體、p -Akt 抗 體、Bax 抗 體、 Bcl -2 抗 體 、Caspase -3 抗 體 均 購 自 Cell signal technology 公司;二喹啉甲酸(BCA)蛋白濃度測(cè)定試 劑盒(Thermo 公司)、渦旋振蕩儀(其林貝爾儀器制造有限公司)、低溫高速離心機(jī)(Eppendorf 公司)、電 泳儀(美國 GE 公司)、轉(zhuǎn)膜儀(美國 GE 公司)。 


1.3 實(shí)驗(yàn)方法


大鼠實(shí)驗(yàn)期間保持 自由飲水和進(jìn)食,飼養(yǎng)環(huán)境溫度為(24±1)℃,濕度 為 55%±5%,實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng) 1 周。根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表將 115 只大鼠分為空白組 (15 只)、假手術(shù)組 (20 只)、痰濁組(20 只)、血瘀組(30 只)、痰瘀互結(jié) 組(30 只)??瞻捉M、假手術(shù)組和血瘀組用普通飼料 喂養(yǎng) 8 周。痰濁組和痰瘀互結(jié)組用高脂飼料喂養(yǎng) 8 周,第 49 天目?jī)?nèi)眥取血,剔除血脂未升高的大鼠。 第 54 天,血瘀組和痰瘀互結(jié)組行冠狀動(dòng)脈左前降 支結(jié)扎術(shù),假手術(shù)組只穿線,不結(jié)扎。實(shí)驗(yàn)過程中剔 除不符合標(biāo)準(zhǔn)的大鼠,并記錄死亡情況。8 周末大鼠腹腔注射 10% 水合氯醛麻醉,腹主動(dòng)脈取血后生理鹽水沖洗心 臟,剪取心臟,-80 ℃冰箱保存待測(cè)。


2 結(jié)果


空白組和假手術(shù)組未見明顯細(xì)胞 凋亡,與假手術(shù)組相比,痰濁組、血瘀組和痰瘀互結(jié) 組大鼠心肌細(xì)胞凋亡數(shù)目增加,痰濁組大鼠心肌可 見少量細(xì)胞凋亡,血瘀組和痰瘀互結(jié)組大鼠心肌組 織存在大量細(xì)胞凋亡。與假手術(shù)組相比,空白組大鼠 Akt、Bcl-2、Bax 和 Caspase-3 蛋白表達(dá)水 平和 Bax/Bcl-2 比值無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,p-Akt 蛋白表達(dá) 水平明顯升高(P<0.01);血瘀組和痰瘀互結(jié)組大鼠 Akt、p-Akt 和 Bcl-2 蛋白表達(dá)水平明顯降低(P<0.05 或 P<0.01);Bax 和 Caspase-3 蛋白表達(dá)水平明顯升 高(P<0.05 或 P<0.01)。


3 討論 


CHD 屬中醫(yī)“胸痹”范疇,《金匱要略·胸痹心痛 氣短脈證治》中記載:“師曰:夫脈當(dāng)取太過不及,陽 微陰弦,即胸痹而痛,所以然者,責(zé)其極虛也?!碧岢? 胸痹的病機(jī)為“陽微陰弦”,中醫(yī)證型多屬本虛標(biāo) 實(shí),虛實(shí)夾雜的復(fù)合證型?!栋Y因脈治》云:“胸痹之 因,飲食不節(jié),饑飽損傷,痰凝血滯,中焦混濁,則悶 食悶痛之癥作矣?!北砻鳌疤禎帷焙汀把觥睘?CHD 重 要的致病因素。






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