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膿毒癥大鼠脾組織的渦旋振蕩器應用及分析

返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2020-11-04 08:58【

材料與方法


低溫離心機( Eppendorf) ,渦旋振蕩器( 海門其林貝爾) ,TissueLyser II 85300[QIAGEN,BGISEQ-500( 華大 基因) ],Agilent 2100 Bioanalyzer( Invitrogen) ,紫外分光光度 計( NanoDropTM) 。清瘟敗毒飲全成分每劑含生石膏 15 g、生 地黃 7. 5 g、水牛角 15 g、黃連2. 5 g、梔子5 g、桔梗5 g、黃芩5 g、知母 5 g、赤芍 5 g、玄參 5 g、連翹 5 g、甘草 5 g、丹皮 5 g、竹 葉 5 g,每劑用蒸餾水 60 ml 溶解即每 ml 含生藥 1. 5 g。 Trizol 試劑( Invitrogen) ,去離子水 ( Ambion) ,三氯甲烷、異戊醇、異丙醇( 均為西隴化工) 。各組脾組織標本提取總 RNA 后,用帶有 Oligo( dT) 的磁珠富集 mRNA,并于提取到的 mRNA 中加入 Fragmentation Buffer 使其片斷成為短片段,再 以 片 斷 后 的 mRNA 為模板,用六堿基隨機引物( random hexamers) 合成 cDNA 第一鏈,并加入緩沖液、dNTPs、RNase H 和 DNA polymerase I 合成 cDNA 第二鏈,經(jīng)過 QiaQuick PCR 試劑盒純化 并加 EB 緩沖液洗脫經(jīng)末端修復、加堿基 A,加測序接頭,再 經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳回收目的大小片段,并進行 PCR 擴增,從 而完成整個文庫制備工作,構(gòu)建好的文庫用 BGISEQ-500 進 行測序。

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結(jié)果


A、B 組大鼠脾組織 TNF 信號通 路相關(guān)差異基因表達比較,兩組同時上調(diào)的基因有 19 個,同 時下調(diào)的基因有 8 個,下調(diào)轉(zhuǎn)正常的基因有 1 個,正常轉(zhuǎn)上 調(diào)的基因有 5 個,上調(diào)轉(zhuǎn)為正常基因有 7 個,正常轉(zhuǎn)下調(diào)基 因有 13 個。膿毒癥是一種由感染引起的復雜免疫系統(tǒng)紊亂,常危及 患者生命。目前,傳統(tǒng)的廣譜抗感染聯(lián)合臟器支持治療費用 高昂,給個人及社會造成巨大的醫(yī)療負擔。相對于西醫(yī)藥 治療,中醫(yī)中藥如對該病治療具有效果,則更具有效益比。 相關(guān)研究顯示,膿毒癥早期予以中藥干預治療可預防膿毒癥 相關(guān)性胃腸道疾病,有利于減少機械通氣時間及病死率。






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