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其林貝爾

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其林貝爾脫色搖床在對卵巢儲備功能的使用

返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2019-09-18 09:54【

卵巢儲備功能下降是指卵巢內(nèi)所剩卵母細(xì)胞的數(shù)量、 質(zhì)量、潛能下降,導(dǎo)致女性生育力下降,性激素缺乏,常 指雙側(cè)卵巢竇卵泡數(shù)<6 個,抗苗勒管激素 ( AMH) 值低 于 0. 5~ 1. 1 ng /mL。治療方法以激素補(bǔ)充治療 ( HRT) 為主,但長時間應(yīng)用后會增加卵巢癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜 癌的發(fā)生風(fēng)險,患者依從性差; 對有生育要求而采用體 外受精-胚胎移植 ( IVF-ET) 的患者,也存在著周期取消率 高、獲卵率及優(yōu)胚率低等問題,從而導(dǎo)致不良結(jié)局。

1 材料

1. 1 動 物

8 周 齡 SPF 級 雌 性 SD 大 鼠 65 只,體 質(zhì) 量 ( 210±10) g,購自浙江省實(shí)驗(yàn)動物中心,動物合格證號 SCXK ( 浙) 2014-0001,自 由 飲 水 和 攝 食,室 溫 ( 22 ± 2) ℃,相對濕度 50% ~ 70%,晝夜各 12 h。

1. 2 試劑

雷公藤多苷片 ( 浙江得恩德制藥有限公司, 50 mg /片,批號 Z33020422) 。坤泰膠囊 ( 貴陽新天藥業(yè)股 份有限 公 司,0. 5 g /粒,批 號 Z20000083) ; 戊 酸 雌 二 醇 ( 補(bǔ)佳樂) ( 拜耳醫(yī)藥保健有限公司廣州分公司,1 mg /片,批號 J20130009) ; 黃體酮膠囊 ( 安琪坦) ( 浙江仙琚制藥 股份有限公司,0. 1 g /片,批號 H20041902) 。

1. 3 儀器

CX21 型高分辨顯微鏡 ( 日本 Olympus 公司) ; ABI7500 型 Real-time PCR 儀 ( 美 國 Applied Biosystems 公 司) ; Mastercycler nexus PCR 儀、臺式高速冷凍離心機(jī) ( 德 國 Eppendorf 公司) ; 垂直電泳槽、電泳儀 ( 美國 Bio-Rad 公司) ; TS-1000 型脫色搖床 ( 海門市其林貝爾儀器制造公 司) ; TS-12F 型生物組織自動脫水機(jī) ( 孝感市宏業(yè)醫(yī)用儀 器有限公司) ; BMJ-M 型病理組織包埋機(jī)和包埋冷凍臺 ( 天津天利航空機(jī)電有限公司) ; EnSpire 2300 型 酶 標(biāo) 儀 ( 上海巴玖實(shí)業(yè)有限公司) 。

2 方法

65 只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng) 6 d,期間進(jìn)行陰 道脫落細(xì)胞涂片觀察,確認(rèn)所有大鼠動情周期變化規(guī)律, 隨機(jī)分為正常組 10 只、模型組 55 只。參照高慧等方法,將雷公藤多苷片以生理鹽水配成 50 mg /kg 劑量,每日 上午 9 點(diǎn)開始連續(xù)灌胃 14 d,正常組大鼠同時予等體積生 理鹽水。造模第 8 天起,進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞學(xué)涂片,觀察 大鼠動情周期變化,剔除造模失敗者后隨機(jī)分為模型組、 西藥組各 11 只,以及坤泰膠囊組、中西藥組各 12 只。西 藥組 對 處 于 動 情 前 期 的 大 鼠 先 給 予 戊 酸 雌二醇片 ( 0. 12 mg /kg) 2 d,再給予黃體酮膠囊 ( 18 mg /kg) 2 d, 對處于動情后期的大鼠給藥順序恰好相反; 坤泰膠囊組灌 胃給藥劑量 0. 5 g /kg; 中西藥組在坤泰膠囊基礎(chǔ)上加用上述 2 種西藥; 正常組、模型組大鼠灌胃給予等體積生理鹽 水。給藥期間,各組大鼠按體質(zhì)量調(diào)整給藥劑量,連續(xù)給 藥 3 個動情周期。藥物干預(yù)結(jié)束后 15 d ( 保證所有大鼠處于動情 前期) 大鼠禁食不禁水,第 2 天水合氯醛麻醉,腹主動脈 取血,無菌下迅速取出卵巢組織,稱定質(zhì)量,一半置于 -80 ℃冰箱中待測,另一半置于 4%多聚甲醛中待測。 將置于 4%多聚甲醛中的大鼠卵巢組織用 梯度乙醇脫水,石蠟包埋,切片,脫蠟,常規(guī) HE 染色, 光學(xué)顯微鏡下觀察卵巢變化。

3 結(jié)果

給予雷公藤多苷片的 55 只大鼠呈現(xiàn)不同 程度的動情周期紊亂,表現(xiàn)為延長與停滯。連續(xù)灌胃 2 周 后,46 只大鼠出現(xiàn)連續(xù)動情周期紊亂,造 模 成 功 率 為 83. 6%; 2 周治療結(jié)束后,陰道脫落細(xì)胞涂片顯示 28 只大 鼠動情周期恢復(fù) ( 28 /46,60. 9%) ,其中模型組 3 只 ( 3 / 11,27. 3%) ,西藥組 8 只 ( 8 /11,72. 7%) ,坤泰膠囊組 8 只 ( 8 /12,66. 7%) ,中西藥組 9 只 ( 9 /12,75%) 。與正常組比較,模型組 血清 AMH、E2 水 平 顯 著 降 低,LH、FSH 水 平 顯 著 升 高 ( P<0. 05) ; 與模型組比較,坤泰膠囊組、中西藥組、西藥 組 AMH、E2 水平顯著升高 ( P<0. 05) ,中西藥組、西藥組 FSH、LH 水平顯著降低 ( P<0. 05) 。

4 討論

雷公藤多苷是一種細(xì)胞毒性藥物,對機(jī)體內(nèi)分裂增殖 較快的細(xì)胞作用明顯,導(dǎo)致其 DNA 堿基錯配,引起 DNA 鏈斷裂,對卵巢的卵泡細(xì)胞有較強(qiáng)毒副作用,近年來被廣 泛用于卵巢儲備功能下降模型的建立,該方法所需時間短, 成功率高,簡便易行,致病途徑與人類相同,而且符合模型卵巢組織萎縮,卵泡、黃體數(shù)量、卵泡顆粒細(xì)胞減少, 炎細(xì)胞浸潤等特點(diǎn)。造模劑量及時間參照文獻(xiàn) ,以 50 mg /( kg·14 d) 造模最理想。中醫(yī)并無 “卵巢儲備功能下降”這一病名,但可將其 歸于 “不孕癥”“月經(jīng)過少”“月經(jīng)后期” “血枯” “閉經(jīng)” 等范疇,認(rèn)為腎藏精,主生殖,腎虛是本病根本病機(jī),腎 虛陰陽失調(diào),影響及心,心不靜則腎不實(shí),久而必致腎虛, 心腎子宮軸失調(diào),產(chǎn)生各種復(fù)雜病變; 國醫(yī)大師夏桂成認(rèn) 為,本病主要病機(jī)為 “心腎不交”,主要治法為 “交濟(jì)心 腎,以調(diào)心為主”。坤泰膠囊系由仲景名方 “黃連阿膠湯” 化裁而來,方中熟地、阿膠、白芍、茯苓滋腎陰,養(yǎng)精血, 黃連、黃芩清熱瀉火,能有效改善因卵巢功能減退而引起 的癥狀; 現(xiàn)代藥理研究表明,方中熟地、白芍具有雌激素 樣作用,可升高婦女血清 E2 水平; Huang 等 認(rèn) 為,坤泰膠囊等中藥可能通過調(diào)節(jié) GnRH 分泌來促進(jìn)卵泡 發(fā)育與排卵,改善子宮血流,調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜。




 


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