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渦旋混合器對小鼠宿醉頭痛指標(biāo)的分析

返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2019-08-14 11:21【

中國酒文化源遠(yuǎn)流長,酒在當(dāng)今社會的各種交際活 動、社交場合更是不可或缺。但近年來研究顯示,國內(nèi)外急 性酒精中毒發(fā)病率均呈上升趨勢,考慮其龐大群體,并且 容易成為多種急癥的誘發(fā)因素,故應(yīng)予以重視。急性酒精 中毒是指在短時間內(nèi)攝入大量酒精或含酒精飲料后出現(xiàn) 的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂狀態(tài),嚴(yán)重程度與飲酒速度、飲 酒量、血液酒精濃度及個體耐受性等有關(guān),通常伴有頭痛、 頭暈和胃部不適等延續(xù)效應(yīng)。



1 材料與方法

1.1 材料與試劑


同品牌不同勾調(diào)工藝的48°濃香型白酒(編號分別為 ①號、②號),主要理化成分見表1,由四川省綿陽市豐谷酒 業(yè)有限公司提供。



Balb/c小鼠(雄性,日齡(42~48 d),SPF級):北京維通 利華實(shí)驗動物有限技術(shù)公司(生產(chǎn)許可證號:SCXK(京) 2016-0011)。獨(dú)立通氣籠盒(individually ventilated cages, IVC)室飼養(yǎng),環(huán)境溫度20~22 ℃,相對濕度60%~70%,由 四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院實(shí)驗動物中心提供(使用許可 證號:SYXK(川)2018-011)。



1.2 儀器與設(shè)備

7890B氣相色譜儀、7697A頂空進(jìn)樣器:美國Agilent公 司;ECTM-WAX毛細(xì)管色譜柱(30 m× 0.53 mm×1.2 μm):美 國Alltech公司;HeraeusTM FrescoTM 21微量離心機(jī)、Multiskan Go全波長酶標(biāo)儀:美國Thermo Scientific公司;749540-0000 手持式勻漿器:美國Kimble公司;γ放射免疫計數(shù)器:安徽 中科中佳科學(xué)儀器有限公司;手動連續(xù)分液器:美國Gilson 公司;TS-1脫色搖床、XW-80A渦旋混合器:海門市其林貝爾儀器制造有限公司;隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱:上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠;V型槽:自制。‘



1.3 方法

1.3.1 動物分組與處理


160只Balb/c小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)后,按體質(zhì)量進(jìn)行分層隨 機(jī)分組,分為樣①組、樣②組、酒精對照組和空白對照組, 劑量設(shè)置見表2。




1.3.2 翻正反射實(shí)驗


禁食不禁水12 h,不同組別小鼠稱體質(zhì)量后,分別按相 應(yīng)劑量進(jìn)行灌胃。參考CRABBE J C等方法,將小鼠背部 置于V型槽中呈仰位,30 s內(nèi)未能翻轉(zhuǎn)身體,即翻正反射 消失,記錄醉酒時間(min);60 s內(nèi)能連續(xù)2次翻轉(zhuǎn)身體,即 翻正反射恢復(fù),記為醒酒時間(min);并計算醉酒率(%)。



1.3.3 標(biāo)本采集與處理

當(dāng)小鼠翻正反射恢復(fù)時,立即抓取固定使其眼球突出 充血,用彎頭眼科鑷迅速鉗取眼球,使血液流入抗凝離心 管中,顛倒混勻后4 ℃、3 000 r/min離心15 min,取上清, -20 ℃冰箱保存?zhèn)錅y。不同的抗凝劑適用于不同的指標(biāo)測 定,加入100 μL肝素鈉溶液的抗凝管用于乙醇、PGE2、HIS 含量測定;加入100 μL 1% EDTA、100 μL抑肽酶的抗凝管 用于ET、SP、MEK、CGRP含量測定。



1.3.4 指標(biāo)檢測

血漿乙醇濃度測定:標(biāo)本平衡至室溫后,取200 μL待 測標(biāo)本加入頂空玻璃中,再加入2 mL超純水,蓋緊瓶蓋后 放于頂空進(jìn)樣裝置中進(jìn)行汽化平衡,自動進(jìn)樣1 mL,氣相 色譜法檢測。色譜條件:ECTM-WAX毛細(xì)管色譜柱(30 m× 0.53 mm×1.2 μm);分流進(jìn)樣,分流比10∶1;載氣:N(純度 2 99.999%),流速25 cm/s;氫火焰離子化檢測器:250 ℃;進(jìn) 樣口溫度:200 ℃;程序升溫:40 ℃保留5 min,以20 ℃/min 升至200 ℃,保留7 min;頂空氣化條件:平衡時間30 min,加 熱溫度70 ℃,傳輸線溫度90 ℃,進(jìn)樣針溫度70 ℃。



2 結(jié)果與分析

急性酒精中毒是指一次性過量飲酒所致的急性中毒, 常伴有頭痛、頭暈和胃部不適等延續(xù)效應(yīng)。研究表明,當(dāng) 乙醇暴露劑量超過3.5 g/kg,絕大多數(shù)小鼠均會出現(xiàn)翻正反 射消失的現(xiàn)象,故根據(jù)前期預(yù)實(shí)驗,本研究采用11 mL/kg 體質(zhì)量(約4.2 g/kg)的單次灌胃劑量進(jìn)行急性酒精中毒 模型建立。飲酒后,乙醇主要在胃腸道被吸收,約90%~98%的 乙醇通過肝臟進(jìn)行代謝,代謝速率與攝入量、酶活性等相 關(guān)。飲酒后,乙醇主要在胃腸道被吸收,約90%~98%的 乙醇通過肝臟進(jìn)行代謝,代謝速率與攝入量、酶活性等相 關(guān)。CGRP是血管周圍神經(jīng)釋放的最主要的血管活性肽類 物質(zhì),是迄今已知最強(qiáng)的血管舒張肽,在偏頭痛的發(fā)病機(jī) 制中起著關(guān)鍵性作用。



3 結(jié)論

綜上所述,不同濃香型白酒對小鼠宿醉頭痛相關(guān)效應(yīng) 指標(biāo)的影響存在差異,其中酒樣①較酒樣②能誘導(dǎo)產(chǎn)生更 高的SP、MEK含量水平,結(jié)合白酒理化成分分析,提示可 能與酒樣中較高的總酸、乙醛、乙縮醛等微量成分有關(guān)。







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